蛋白酶抑制剂
摘要:用多种小分子组成的抑制剂混合物来抑制蛋白酶的功能,阻止蛋白降解情况的发生。
内源蛋白的产生和降解一般都维持在一个平衡状态,因此在稳定的环境因素下细胞内的蛋白含量是也是稳定的。但是在体外研究中,蛋白合成过程终止,而降解大大增强,从而影响蛋白得率。因此我们建议使用多种小分子组成的抑制剂混合物来抑制蛋白酶的功能,阻止蛋白降解情况的发生。
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常见问题:
为什么要用蛋白酶抑制剂Cocktail?
回答1: 蛋白酶抑制剂Cocktail是低毒,全面的蛋白保护试剂,最大限度地保护蛋白,使其免于被蛋白酶降解。目前生物学研究日渐深入,更多地将目标锁定为细胞中较为微量的蛋白,如信号通路蛋白、受体蛋白,采用coIP,Pull-down等方法获得样品。对于这些微量的珍贵样品,Cocktail能取得最佳的保护效果,比单一的抑制剂(如PMSF)更为可靠。
问题2: 实验中经常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂Cocktail和它比有什么优势?
回答3: PMSF是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂,以前被广泛应用于细胞裂解纯化蛋白过程。但由于PMSF在很多方面存在明显的缺点,逐步被保护效果更好,更安全的蛋白酶抑制剂Cocktail所取代。PMSF的毒性较高,因此在蛋白酶抑制剂中选用Cocktail作为其替代品。的半致死量是2834mg/kg,而PMSF是200mg/kg,Cocktail安全域值超过PMSF十四倍多,同时有着相当的抑制效果,对于很多丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更为迅速。PMSF的另一个缺点是易降解失效,它在水溶液中的半衰期是30min,在细胞裂解过程中很容易失效。而蛋白酶抑制剂Cocktail不但保护更加全面,而且效果更加持久。